Reagensi za kondenzaciju peptida

Trenutno se u sintezi peptida uglavnom koriste metode karboksilne aktivacije za dovršetak peptidnih reakcija. Najranije korištene metode bile su aktiviranje aminokiselina u kiselinske kloride, azide, simetrične anhidride i miješane kiselinske anhidride. Međutim, zbog postojanja racemizacije aminokiselina pod tim uvjetima, opasnosti od reakcijskih reagensa i složenosti pripreme, oni su postupno zamijenjeni kasnijim kondenzacijskim reagensima, koji se prema svojoj strukturi mogu podijeliti u dvije vrste.: Glavni kondenzacijski reagensi su: karbodiimidni tip, tip onijske soli (uronij).

Uglavnom uključuje: DCC, DIC, EDC.HCl čekanje. koristite DCC izvedite reakciju, zbog DCU, postoji DMF Ima vrlo malu topljivost i proizvodi bijeli talog, tako da se općenito ne koristi u sintezi čvrste -faze. Međutim, budući da je jeftin, može se ukloniti filtracijom u sintezi tekuće-faze i još uvijek se široko koristi. EDC.HCl Zbog svoje topljivosti u vodi često se koristi u povezivanju polipeptida i proteina, a također je vrlo uspješan. Međutim, jedan od najvećih nedostataka ove vrste kondenzacijskog reagensa je da će, ako se koristi sam, biti više nuspojava. Međutim, istraživanja pokazuju da ako se dodaju tijekom procesa aktivacije HOBt, HOAt Takvi reagensi mogu kontrolirati nuspojave u vrlo niskom rasponu. Mehanizam reakcije je sljedeći:

Slika 2 Mehanizam reakcije aktivacije DIC-a

Kondenzacijski reagensi tipa onijeve soli imaju visoku reaktivnost i veliku brzinu, a sada se široko koriste, uglavnom uključujući: HBTU, TBTU, HATU, PyBOP čekanje. Tijekom upotrebe ovog reagensa potrebno je dodati organsku bazu, kao što je diizopropiletilamin (DIEA), N- metilmorfolin (NMM). Aminokiselina se može aktivirati tek nakon dodavanja ovog reagensa. Mehanizam reakcije je sljedeći:

Smole koje se koriste u sintezi peptida u čvrstoj -fazi općenito su polistiren-divinilbenzenski materijali, s veličinama u rasponu od 75 do 150 μm, Stupanj unakrsnog-vezivanja je između 1-2%, a većina onih koji se sada koriste je 1%, jer pri ovom stupnju unakrsnog-vezivanja, smola DMF, DCM ima dobro bubrenje svojstva i ima tro-dimenzionalnu mrežnu strukturu, a molekule reaktanata mogu se slobodno kretati unutar smole. Najkritičniji dio smole je spojni krak koji je na jednom kraju spojen na smolu, a na drugom kraju služi kao mjesto reakcije. Smole koje se trenutno široko koriste su: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA čekaj. u PAM-u, MBHA se koristi u BOC strategiji, jer je vrlo stabilan na kiselinu, mora biti HF, TFMSA Može se rezati samo pod jakim kiselim uvjetima.

Nakon što je sinteza peptida u čvrstoj{0}}fazi dovršena, mora se odabrati odgovarajući reagens za cijepanje da se peptid odcijepi od smole, a zatim precipitirati ledenim eterom, sakupiti talog centrifugiranjem i HPLC-om odvojiti, pročistiti i-osušiti smrzavanjem kako bi se dobio konačni peptidni proizvod.

Zbog različitih odabranih smola i sekvenci aminokiselina, metode cijepanja odabrane tijekom cijepanja nisu potpuno iste. Općenito, uvjeti cijepanja su odabrani pod kiselim uvjetima. Za PAM, MBHA smolu, općenito korišteno HF rezanje, p-krezol, p-merkaptofenol, anisol i druge reagense potrebno je dodati tijekom procesa rezanja. A za Wang, Rink-amid, Trt smolu, općenito korištenu TFA rezanje, dodajte etilen glikol, anisol sulfid, vodu, triizopropilsilan, fenol itd. tijekom procesa rezanja.

Ovi aditivni reagensi se uglavnom koriste kao reagensi za hvatanje karbokationa. Svrha je uhvatiti karbokation koji nastaje tijekom reakcije cijepanja i smanjiti nuspojave uzrokovane napadom ovih iona karbokationa na bočne lance nekih aminokiselina. Aminokiseline koje će vjerojatnije izazvati nuspojave uključuju: Trp, Tyr. Doziranje reagensa za rezanje općenito je 10-15 ml/g smole.

Uobičajeno korišteni omjeri rezanja: HF/p-krezol/p-tiokrezol(90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2,5/2,5), Reakcija se obično provodi na sobnoj temperaturi 2 h-4h.

U sintezi peptida-krute faze često se susrećemo s problemom neuspjeha sinteze peptida ili niske učinkovitosti sinteze. Glavni razlog je peptidna sekvenca, jer se neke peptidne sekvence formiraju na smoli. -Savijanje mijenja svojstva bubrenja smole, a također može zatrpati aktivna mjesta reakcije u smoli, otežavajući odvijanje reakcije. Aktualni izvještaji to pokazuju

Upotrijebite miješana otapala, DMSO/DMF, 6N otopinu gvanidina/DMF

Povećajte temperaturu reakcije ili upotrijebite mikrovalnu metodu

Koristite kaotropne soli, LiCl, NaClO4 pričekajte.

Upotrijebite one s boljim svojstvima bubrenja PEG-PS smole, uz smanjenje količine smole (0,05-0,2 mmol/g)

​